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        核酸提取試劑,盡在西寶生物

        來源:作者:人氣:-發表時間:2020-05-12 14:19:00【
        核酸是分子生物學的基礎,而核酸提取是整個分子行業繞不過去的門檻,很多時候核酸樣本提取的好壞直接決定了檢測結果是否有效。新型冠狀病毒的檢測多數采用核酸檢測方法,高質量的核酸提取是保證下游檢測結果的前提,西寶生物提供多種核心核酸提取試劑,品種齊全,現貨供應,省時方便,詳情致電400-021-8158。
        核酸提取與純化的應用
        ①分析基礎研究和疾病研究中的基因表達; 
        ②跟蹤對藥物治療的反應(例如,在抗病毒治療期間和之后監測病毒滴度);
        ③識別新物種并深入了解進化過程(例如,Ancient DNA分析); 
        ④對人類、動物和植物中引起傳染病暴發的病原體進行監測和分類(例如:2019-nCoV檢測);
        ⑤通過微生物檢測和量化監測食品和水安全; 
        ⑥診斷疾病(如基因疾病,癌癥,免疫學缺陷)。
        核酸的分離是現代科學的重要成果之一,它給人類生活帶來了巨大的進步。隨著高通量和自動化提取技術的應用,大大簡化了DNA或RNA的分離過程。此外,下一代測序技術的發展推動了核酸分離純化市場的發展,因為DNA和RNA的純化對獲得準確的核酸數據起著至關重要的作用。
        核酸提取與純化的原則和要求
        1、保證核酸一級結構的完整性
        2、排除其它分子的污染(如提取DNA時排除RNA的干擾)
        3、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和高濃度的金屬離子
        4、盡可能降低蛋白質、多糖和脂類等大分子物質
        核酸提取純化方法眾多,但關鍵性試劑原料的質量直接影響著核酸提取的純度和質量,下面我們介紹一下常見的幾款核酸提取用試劑原料。

        焦碳酸二乙酯(DEPC)
        CAS:1609-47-8

        焦碳酸二乙酯(DEPC):是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑,他通過和RNA酶的活性基因團組氨酸的咪唑環結合使蛋白質變性,從而抑制酶的活性。可以用作抗菌添加劑、組氨酸殘基改性劑,以及用于亞胺轉變為氨基甲酸酯的試劑。
        在溶液中濃度約為 0.1% (v/v) 時可使 RNase 失活,從而防止RNA被降解。
        應用
        用作RNA酶抑制劑。用于提取RNA。

        蛋白酶K
        CAS:39450-01-6

        蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。滅活核酸酶(DNase和RNase) , DNase和RNase也用于去除不需要的核酸,有人使用蛋白酶替代DEPC處理水,蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。在較廣的pH范圍內均有活性(pH4-12.5)溫度范圍37-60度鹽濃度3mGuHCI或4m尿素中均有活性,在一些去污劑:Tween20 (5%)、Triton X-100 (1%)和SDS (1%)條件下也有活性。蛋白酶K的一般工作濃度是50-100ug/ml
        蛋白酶K消化裂解法適用于所有標本的消化處理,尤以DNA樣品為佳.如組織細胞(包括石蠟包埋組織)絨毛、毛發、精斑、血液(血清、血漿、全血)局部分泌物、尿,糞便等。

        鹽酸胍 + 尿素
        CAS:50-01-1 + CAS:57-13-6

        鹽酸胍是一個核酸酶的強抑制劑,它并不是一種足夠強的變性劑,可以允許完整的RNA從富含Rase的組織中提取出來。核酸提取過程中用于使核酸結合在硅質上,4-8M可斷裂氫鍵,有兩種可能機制:
        1、變性蛋白和鹽酸胍、尿素優先結合,形成變性蛋白-變性劑復合物,當復合物被除去,從而引起N-D反應平衡向右移動,隨著變性劑濃度增加,天然狀態的蛋白不斷轉變為復合物,最終導致蛋白質完全變性;
        2、鹽酸胍、尿素對氨基酸的增溶作用,能形成氫鍵,當濃度高時,能破壞水的氫鍵結構,結果鹽酸胍、尿素就稱為非極性殘基的較好溶劑,使蛋白質內部的疏水殘基伸展和溶解性加強,鹽酸胍、尿素引起的變性往往是不可逆的。高濃度尿素使蛋白質變性并抑制Rnase活性.
        應用
        作為提取細胞總RNA實驗中的強烈變性劑。鹽酸胍溶液可溶解蛋白質,導致細胞結構破壞,核蛋白二級結構破壞,從核酸上解離下來,此外,RNA酶可被鹽酸胍等還原劑滅活。

        異硫氰酸胍
        CAS:593-84-0

        異硫氰酸胍強用力的蛋白質變性劑,能迅速溶解蛋白質,導致細胞結構破碎,核蛋白由于其二級結構的破壞消失而迅速與核酸分離。胍鹽是破壞蛋白質三維結構的離液劑,在通常使用的蛋白質變性劑中作用最強的是異硫氰酸胍,它們可以使多數蛋白質轉換成一隨機的卷曲狀態。在還原劑存在的情況下,異硫氰酸胍可以斷裂氫鍵。
        總RNA抽提試劑常用的是TRIZol法,它可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質,能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。
        TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞,使細胞中的蛋白,核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中還加入了8-羥基喹啉異硫氰酸胍β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase(RNA酶)。
        ※0.1%的8-羥基喹啉可以抑制RNase,與氯仿聯合使用可增強抑制作用。
        ※異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強力的蛋白質變性劑,可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失,導致細胞結構降解,核蛋白迅速與核酸分離。
        ※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。

        十二烷基硫酸鈉(SDS)
        CAS:151-21-3

        十二烷基硫酸鈉(SDS)陰離子去垢劑,常用于進行SDS-PAGE、DNA提取等需要蛋白變性的操作。高溫(55-65℃)裂解細胞,使染色體離析,蛋白變性,形成SDS/蛋白質/多糖復合物,釋放核酸,提高鹽(KAC或NaAc)濃度并降低溫度(冰浴),使SDS/蛋白質/復合物轉變為溶解度更小的鉀鹽酸形式,使蛋白質及多糖雜質沉淀更加完全、離心后除去沉淀,上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀水相中的DNA
        操作簡單,溫和,可提取到高分子量的DNA,但產物多糖類雜質較多
        SDS能裂解細胞。使細胞中的蛋白質和核酸之間常借著靜電引力或配位鍵結合,陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,使染色體離析,蛋白變性,釋放核酸。
        (1) SDS是一種陰離子表面活性劑,能使蛋白質的氫鍵和疏水鍵打開,并結合到蛋白質的疏水部位;
        (2) SDS可引起蛋白質構象改變
        (3) SDS是一種良好的解離劑,可使蛋白質溶解,變性
        (4) 形成SDS-蛋白質復合物,并使復合物帶負電
        西寶生物核酸提取相關產品列表
        產品名稱 貨號 CAS 包裝
        DEPC Diethyl pyrocarbonat 焦碳酸二乙脂(液體) 129621 1609-47-8 25ml
        Guanidine Thiocyanate 異硫氰酸胍 ACH0012E 593-84-0 250g
        Guanidine hydrochloride 鹽酸胍 142790 50-01-1 1kg
        Proteinase K 蛋白酶K EBY0027I 39450-01-6 100mg、1kg
        Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸鈉(SDS) 175583 151-21-3 25kg
        Urea 尿素 ACH0029A 57-13-6 500g
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        此文關鍵字:核酸提取試劑
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